基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略 逆转录的原理及主要过程


原理:获取组织或细胞里的总RNA , 以其中的mRNA做为模板 , 选用Oligo或随机引物运用逆转录酶反转录成cDNA 。再用cDNA为模板开展PCR扩增 , 而得到目的基因或检测基因表述 。过程:在逆转录酶影响下以dNTP为底物 , RNA为模板 , tRNA为引物 。
按5′→3′方位 , 生成一条与RNA模板互补的DNA单链 。随后它和RNA模板产生RNA DNA杂交体 , 随后还在反转录酶的影响下 , 水解掉RNA链 , 再以此DNA为模板生成第二条DNA 。逆转录过程是病毒的复制形式之一 , 如RNA病毒里的逆转录病毒 , DNA病毒里的嗜肝DNA病毒和花菜花叶病病毒的复制均需经过逆转录 。
逆转录过程在真核细胞之中同样存在 , 比如逆转座子和端粒DNA的增加均存在逆转录过程 , 需逆转录酶的催化 。逆转录过程的揭示是生物学研究里的重大发现 , 是对中心法则的主要调整和补充 。
人们通过体外模拟该过程 , 以样版中提取的mRNA为模板 , 在逆转录酶的影响下 , 生成出互补的cDNA , 搭建cDNA文库 , 并从中挑选特异的目的基因 。此方法已成为基因工程技术中最常用的得到目的基因的策略之一 。
【基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略 逆转录的原理及主要过程】